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7일째에 분화된
26-04-02 18:11
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7일째에 분화된 세포를 칼슘이나 마그네슘이 없는 Dulbecco 인산염 완충 용액(DPBS −/− )으로 세척한 후, 37°C에서 3~10분 동안 Accumax 용액으로 해리시켰습니다. 세포를 10 μm Y27632가 포함된 UBCM(UBCM-Y)에 재현탁했습니다( 표 S4 ). GDNF 농도는 기존 문헌을 참고하여 원래 프로토콜보다 높였습니다.12 세포 는 칩 및 프린팅 실험에 직접 사용하거나, 제조사의 프로토콜에 따라 AggreWell 800 24웰 플레이트(Aggrewell)의 마이크로웰당 4,000~10,000개의 세포를 접종했습니다. 응집체는 기존의 96웰 형식과는 달리, 다음 날 트랜스웰 시스템 내 50%(부피/부피) 젤트렉스 매트릭스에 고정되었습니다. 겔화 후, 외부 구획에 UBCM을 첨가하고 이후 분화 과정 동안 2~3일마다 교체했습니다. 세포는 37°C, 5% CO₂ 조건 에서 배양했습니다.
트랜스웰에 고정된 오가노이드는 20~34일째에 수확했습니다. 고정된 오가노이드를 분리하기 위해 6웰 플레이트의 3~6개 트랜스웰에서 오가노이드와 기질을 1mL의 DPBS +/+ 가 들어 있는 15mL 원뿔형 튜브에 넣고 1mL 피펫 팁으로 약 10회 피펫팅했습니다. 그런 다음 DPBS +/+ 를 10mL로 추가했습니다 . 혼합물을 300 × g 에서 5분 동안 원심분리하여 세포 펠렛, 겔 분획 및 상층액을 얻었습니다.