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수용체 유비퀴틴화
26-04-28 22:38
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조회수 : 5
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수용체 유비퀴틴화를 통해 세포내이입, 리소좀 수송 및 종양 세포 사멸을 향상시키는 EGFR-유비타ADC 설계
ubitaAb가 더 강력한 ADC로 전환될 수 있는지 평가하기 위해, EGFR-ubitaAb-v2를 기반으로 부위 특이적으로 접합된 ADC를 제작했습니다. EGFR-ubitaADC라고 명명된 이 구조체는 두 가지 효소를 사용하는 세 단계의 화학효소적 당화공학 전략을 통해 생성되었습니다.30 첫 번째 단계에서는 Endo S를 사용하여 보존된 N297 부위의 Fc 글리칸을 제거하여 가장 안쪽의 GlcNAc 잔기를 노출시켰습니다. 두 번째 단계에서는 돌연변이 β1,4-갈락토실전달효소 GalT(Y289L)를 사용하여 아지도 변형 갈락토사민(GalNAz)을 도입했습니다. 마지막으로, 절단 가능한 세포독성 페이로드(endo-BCN-PEG 4 -Val-Cit-PAB-MMAE)를 변형 촉진 아지드-알킨 고리화 반응(SPAAC)을 통해 접합했습니다( 그림 3 A). 모든 항체 및 ADC 구조체는 야생형 인간 IgG1 Fc 영역을 사용하여 제작되었으며, Fc 침묵 돌연변이는 도입되지 않았습니다. 이후 논의에서 설명하는 다른 모든 항체 및 ADC도 동일한 방식으로 생성되었습니다. 대조군으로, 동일한 전략을 사용하여 세툭시맙의 Fc 글리칸에 MMAE를 접합하여 기존의 EGFR-ADC를 제작했습니다. 화학효소적 접합 과정과 생성된 항체-약물 중간체는 SDS-PAGE 분석을 통해 확인했습니다( 그림 S5 A). 소수성 상호작용 크로마토그래피(HIC-HPLC) 31 및 역상 크로마토그래피(RP-HPLC) 분석 결과, EGFR-ADC와 EGFR-ubitaADC 모두에서 서로 다른 약물-항체 비율(DAR)을 갖는 종들이 확인되었으며, 평균 DAR은 각각 약 1.5와 1.3이었습니다( 그림 S5 B 및 S5C). 이러한 결과는 두 구조체 모두에서 효율적인 접합과 제어된 DAR의 유지를 확인시켜 줍니다.